페트리 디쉬의 세균 증식 측정 방법

 박테리아는 페트리 접시에서 박테리아 한천이라고 알려진 고형 분을 가지고 자란다. 개별적인 박테리아 세포와 달리, 집단은 육안으로 볼 수 있을 만큼 충분히 큰 박테리아 집단이다. 세균 증식은 얼마나 많은 군집이 존재하는지에 대한 간단한 관찰로 측정할 수 있지만, 보다 정량적인 방법에는 셀 수 있는 공간 또는 더 자주 실행 가능한 판 카운트 사용이 포함된다. 후자는 또한 다양한 성장 조건의 영향과 같은 질적 정보를 제공하기 때문에 가장 자주 사용된다. 페트리 접시에 수십억개의 박테리아가 있을 수 있기 때문에, 먼저 측정하기 위해서는 식민지의 수를 셀 수 있도록 샘플을 희석하는 것이 필요하다.

 시험관에서 시작 세균 배양 배지 10개를 희석 배지 90개에 첨가한다. 튜브의 뚜껑을 단단히 닫고 균일한 혼합물을 얻기 위해 소용돌이를 부드럽게 친다. 이제 샘플은 원래 농도의 10분의 1입니다. 이 새 샘플의 10마이크로 리터를 희석 매체 90마이크로 리터가 들어 있는 새 시험관에 옮기고 다시 혼합한다. 다시 한번, 결과는 더 희석된 표본이 됩니다. 이제 표본 농도가 원래 농도의 100분의 1이 됩니다. 원래 샘플이 104~1010회 희석될 때까지 이 과정을 여러번 반복합니다. 각 튜브에 올바른 희석 효과가 표시되어 있는지 확인합니다.

 한천 평판에 마지막 희석이 완료된 10마이크로리터를 분사한다. 확산 가장자리를 사용하여 한천 평판 전체에 골고루 뿌린다. 접시 두개가 더 나올 때까지 이것을 반복하세요. 비교를 위해 이러한 단계를 다른 희석 수준과 함께 수행하는 것도 일반적입니다. 반드시 접시의 바닥에 라벨을 붙이세요. 각 플레이트의 뚜껑을 교체하고 한천 평판을 화염 아래의 실험실 벤치 또는 인큐베이터에서 몇분간 건조시킨다. 배양기에 접시를 넣어 박테리아의 무리에 알맞은 온도로 맞춘다. 12시간에서 16시간 동안 자라도록 놔두세요.

 16시간 후에는 색상을 볼 수 있어야 하지만, 일부 유전자 수정에는 더 오랜 시간이 필요할 수 있다. 군집을 관찰할 수 있게 되면, 판을 꺼내서 30에서 300개 사이의 군집을 찾습니다. 영구 마커를 사용하여 한천이 아닌 한천 측면에 점을 찍는다. 각 마커 점을 카운트합니다. 각 요리에 대해 반복하세요.

 이 실험을 위한 시작 배양에서 박테리아의 양을 측정하기 위해서는 두곳에서 희석 효과를 반대로 계산해야 합니다. 먼저 시험관에서 1마이크로 리터를 채취해 페트리 디쉬에 넣었을 때 희석된 샘플의 10분의 1을 채취했습니다. 그래서 그 반대로 모든 것을 10배로 곱해야 합니다. 또한 시험관 내 희석 인자가 10과 -7같은 경우에는 희석 효과를 반전시키기 위해 집락 수를 107으로 곱해야 한다. 계산에서 지수에서 음수 부호를 제거하기만 하면 됩니다. 다음 공식을 사용합니다. [카운트된 집락 수]×10×원래 농도에 도달하기 위해 표본을 몇번 곱해야 하는가:10]=시작 배양 분석당 5집락 형성 단위(CFU)수 이것은 당신의 페트리 접시에 있는 박테리아의 성장입니다.